腦脊液(Cerebro-Spinal Fluid，CSF)是存在于腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)的無色透明液體，由腦室中的脈絡(luò)叢產(chǎn)生

，與血漿和淋巴液的性質(zhì)相似，正常成年人的腦脊液約100~150ml，弱堿性，不含紅細(xì)胞；正常腦脊液具有一定的化學(xué)成

分和壓力，對維持顱壓的相對穩(wěn)定有重要作用，當(dāng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損時，腦脊液的檢測成為重要的輔助診斷手段。

總蛋白(Total Protein，TP)由白蛋白和球蛋白組成，對于生物體液(血清、尿液、腦脊液)中總蛋白質(zhì)含量的測定，

一般要基于如下兩個假設(shè)：1、所有蛋白質(zhì)分子由純多肽組成，含氮量的質(zhì)量百分比為16%；

2、體液中含有數(shù)百個蛋白質(zhì)分子，每個分子對測定反應(yīng)都具有非常相似的特性，目前常用的檢測總蛋白的方法有：

雙縮脲法、紫外分光光度法、染料結(jié)合法、凱氏定氮法、沉淀法等。

腦脊液總蛋白檢測試劑盒(染料結(jié)合比色法)其檢測原理是在酸性條件下，伊紅解離成陰離子型，染料瞌顏色逐漸褪

去，使試劑空白吸光度降低；蛋白質(zhì)多肽中的殘基解離成帶有-NH3+基團(tuán)，與伊紅結(jié)合成紅色蛋白復(fù)合物，其吸光度與蛋白濃度呈比例，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液比較，測得樣本中蛋白質(zhì)的含量，

可用于人或動物腦脊液樣本中的總蛋白含量測定。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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